磺胺类药物在猪肉中的残留检测——样品前处理改善方法

1、合作实验单位：浙江省兽药饲料监察所、浙江省畜产品质量安全检测中心
2、依照方法：国家农业行业标准 NY5029—2001
3、样品：猪肉
4、国标规定的提取和纯化过程如下：
称取组织样品5g(精确到0.1g)，加入乙腈25ml， 无水硫酸钠少许（血清除外），匀浆后，以3000r/min 的速度离心5min。分离后的残渣再用25ml 乙腈处理，振荡10min 后，以3000r/min 的速度离心5min。合并两次的上清液，加入正己烷30ml，振荡10min 后，以3000r/min 的速度离心5min，取下层液体，加入正丙醇10ml，50 摄氏度下减压干燥（1） ，残留物用95%乙腈3ml 溶解，过Sep Pak 氧化铝B 柱。用95%乙腈5ml 过柱，不收集，再用70%乙腈10ml 洗脱后，洗脱液中加入5ml 正丙醇，50C 下减压干燥（2）后，残留物用2.0ml流动相溶解，所制样液用高效液相色谱仪进行检测。
5、目前使用的仪器：
BUCHI 旋转蒸发仪R-200+VACCUMBRAND 真空隔膜泵 2 套
6、实验过程中碰到的问题：
1) 处理的样品数量大，平均每天处理60 个样品，每次20～30ml 样品量；每天同时用2 套旋转蒸发仪处理，2 个人平均每人每天处理30 次，每次蒸发大概需要8～10min(不含中间转换时间)。操作过程繁琐、时间长。
2) 无法进行真空度控制，样品在蒸发过程中容易暴沸。并且溶液来不及冷凝全部被带到真空泵中。
7、解决方案：
使用的仪器：
BUCHI 12 位快速蒸发仪（Multivapor12）+BUCHI 真空隔膜泵（V-700）带真空控制器（V-855）
       
选择的实验：因为第二步减压干燥是含有30％的水较难蒸馏，所以我们直接选择了第二步来做实验。蒸发的溶液：样品＋10ml 70%乙腈（30％水）＋5ml 正丙醇，大概20ml处理的样品数量：一次12 个操作过程：
1) 仪器连接、准备完毕，Multivapor12 预热到50C。
2) 将 12 个样品分别倒入对应编号的12 根样品管。
3) 将 12 根样品管放入仪器内，盖好真空盖，开始旋转。
4) 在真空控制器 V-855 上设置减压蒸馏的程序：常压快速到250mbar,3min 内到80mbar 维持10min,再降到40mbar（水在50C 时被蒸发出来的真空度
为40mbar—参考V-855 内的溶剂数据库）.
5) 按“开始”键后，真空泵开始按照程序抽真空。
6) 样品蒸到尽干，实验结束
操作时间：整个操作时间25min 左右。
问题：在真空度40mbar 蒸馏水时，乙腈已被完全蒸出并冷凝到回收瓶内，但是乙腈在40mbar的真空度时会再次蒸发、暴沸，影响水的蒸馏速度。
解决办法：
1）在接收瓶下放一盛有冰块的杯子，提供更好的冷凝。
2）在蒸完乙腈后，停止蒸馏，将接收瓶倒空。然后直接将真空度降到40mbar蒸馏水。
结论：使用BUCHI 的12 位快速干燥仪只需要25min 就可以同时处理完12 个样品，而且解决了在操作过程中不易控制的暴沸问题，并将大部分溶剂冷凝回收。