硫脲嘧啶类药物测定方法（三）

时间：2023-03-24 21:56:09来源：food栏目：食品快速检测阅读：

硫脲嘧啶类药物测定方法（三）

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

(7)毛细管电泳法(capilliary electrophoresis，CE)

CE作为一种常见的色谱方法也被应用于动物基质或饲料中硫脲嘧啶类药物的检测，通常配备激光介导荧光检测器(LIFD)和电化学检测器(ECD)等，但是，其特异性和灵敏度尚不能满足有效监控的要求。

PerezRuiz等采用CE测定了饲料和尿液中的硫脲嘧啶和苯基硫脲嘧啶。分析物在强碱条件下经5-IAF衍生化后，采用CE-LIFD检测。样品采用高压注射(0.5psi，5s)进样，常规电极分析，电压12kV，电流约50mA。分离采用未涂层的熔融石英毛细管(75umi.d，375umo.d.)，长57cm(有效长度50cm)，柱温25℃，运行缓冲液为20mmol/L磷酸盐缓冲液(pH10)。LIFD系统包括一个空气冷却的3mW氩离子激光(激发波长488nm)，一个陷波滤波器(488nm)和一个选择性检测产生荧光的带通滤波器(520nm)。该方法线性范围为0.1～11umol/L，回收率在75%～92%之间，RSD小于3%。Kong等采用CE-ECD建立了同时检测饲料中5种硫脲嘧啶类药物的分析方法。采用自制的壁射流ECD检测器，铂盘工作电极(300um i.d.)，检测分析物氧化电流。在优化实验条件下，5种药物可在15min内，在电压16kV下，由20mmol/L硼酸钠缓冲液(pH9.2)有效分离。甲巯咪唑的LOD为7.6ug/kg，丙基硫脲嘧啶为25ug/kg，苯基硫脲嘧啶为15ug/kg，硫脲嘧啶为18μg/kg，甲基硫脲嘧啶为20μg/kg。

(8)气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)

色-质联用技术的飞速发展有力地促进了硫脲嘧啶类药物残留分析方法的进步。色谱技术保证硫脲嘧啶类药物高效分离的同时，质谱技术为阳性样品的确证提供了丰富的结构信息。衍生化后的硫脲嘧啶类药物，GC-MS的检测灵敏度可以降低到50ng/g以下，气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)更可以降低到25ng/g以下。电子轰击电离(EI)、化学电离(CI)技术均有应用。

Yu等开发了牛肉中的硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、丙基硫脲嘧啶和苯基硫脲嘧啶的GC-MS分析方法。甲酯化衍生物进GC-MS分析，HP UItra 2毛细管柱程序升温分离，初始炉温70℃，保持0.5min，以10℃/min升至90℃，再以20℃/min升至280℃，保持2.5min，250℃不分流进样，载气为氦气，流速1mL/min，质谱温度280℃，EI源电力，以选择离子模式(SIM)模式监测。该方法回收率在50%～90%之间，CV小于10%；硫脲嘧啶的LOQ为25μg/kg，其他药物为15μg/kg。Liu等建立了动物组织中5种硫脲嘧啶类药物的残留分析方法。PFBBr和MSTFA衍生产物用GC-MS测定，DB-5ms毛细管柱程序升温分离，氦气为载气，流速1mL/min，初始炉温100℃，保持2min，以15℃/min升至260℃，再以10℃/min升至290℃，保持5min，250℃进样，EI电离源，70eV电离能量，离子源温度200℃，接口温度250℃，SIM模式监测。组织中的平均回收率在71.5%～96.9%之间，RSD低于10%；巯基苯并咪唑的LOD为10mg/kg，苯基硫脲嘧啶为5mg/kg，硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶和丙基硫脲嘧啶为2mg/kg。Zou等建立了牛奶与尿液中硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、丙基硫脲嘧啶、苯基硫脲嘧啶和甲巯咪唑的残留分析方法。PFBBr和MSTFA衍生产物用GC-MS测定，DB-5MS毛细管柱程序升温分离，载气为高纯氦气，流速1mL/min，不分流进样，进样口温度250℃，离子源温度200℃，接口温度250℃，EI电离源，70eV，SIM模式监测。5种药物的回收率在70%以上，RSD在2.1%～7.9%之间；甲巯咪唑的LOD为0.004μg/g，其他药物为0.0016μg/g。陈华宜等建立了GC-MS测定猪肾中硫脲嘧啶类药物的筛选方法，不需要衍生化，直接进样检测。采用HP-5MS弹性石英毛细管柱分离，进样口温度250℃，柱温70℃保持0.6min，以25℃/min的速度升至200℃，保持5.2min，不分流进样，载气为高纯氦气，柱流量1.0mL/min；质谱接口温度280℃，EI源电子能70eV，电子倍增器电压2094V，全扫描方式(full scan)，扫描范围35～550分子量。结果在一份猪肾样品中检出了N，N-二甲基硫脲和甲巯咪唑。

Batjoens等建立了一种测定尿液中4种硫脲嘧啶类药物的气相色谱-离子阱质谱(GC-MSn)分析方法，即使在提取和净化的损失较大的情况下，灵敏度仍可以达到50ppb。采用HP Ultra 2毛细管色谱柱，初始柱温100℃，以15℃/min升到200℃，再以30℃/min升到300℃，保持3min，进样温度260℃，传输线温度300℃，载气为氦气，扫描范围80～400分子量，EI电离。MSTFA衍生化产物通过一级质谱全扫描筛查；发现可以结果时，再采用二级质谱查找子离子确证。Pensabene等也建立了组织中4种硫脲嘧啶类药物的GC-MSn确证方法。MSTFA衍生物采用Rtx-5MS毛细管柱(30m×0.25mmid，0.25um)程序升温分离，EI电离，二级质谱确证，确证浓度可以达到0.1μg/g。

Le Bizec等报道了甲状腺中6种硫脲嘧啶类药物的GC-MS分析方法。PFBBr和MSTFA衍生产物用GC-MS检测，传输线温度280℃，进样口温度250℃，HP-1毛细管柱程序升温分离，氦气为载气，流速1mL/min，采用负化学源电离(NCI)，氨气为反应气，SIM模式监测，检测限优于1ng/g，方法回收率在40%～70%之间。该研究还同时在EI电离和正化学源电离(PCI)模式下，进行了特异性分析。

(9)液相色谱-质谱法(liquid chromatography. mass spectrometry，LC-MS)

LC-MS技术，特别是液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术的完善，有效地促进了硫脲嘧啶类药物残留测定方法的进步，目前已成为硫脲嘧啶类药物残留分析的主要手段。常用的接口技术有大气压化学电离源(APCI)和电喷雾电离源(ESI)。

Blanchflower等中率先报道利用LC-MS技术测定了牛尿和甲状腺中的5种硫脲嘧啶类药物。Prodigy ODS3反相色谱柱(150mm×4.6mm i.d.)分离，含0.1%七氟丁酸的去离子水和55%甲醇溶液(含0.1%七氟丁酸)为流动相，梯度洗脱，流速1mL/min，采用APCI源，源温150℃，APCI探针温度450℃，鞘气和干燥气流速分别为50L/h和200L/h，SIM模式监测[M+H]+。该方法添加回收率在48.1%～95.8%之间，检出限在25ng/g以下。

De Wasch等运用液相色谱-离子阱质谱(LC-MSn)测定了甲状腺和肉中6种硫脲嘧啶类药物的NBD-CI衍生物。用Symmetry C18色谱柱(5um，150mm×2.1mm)分离，甲醇和0.73%乙酸溶液为流动相，线性梯度洗脱，ESI+电离源，MSn监测二级子离子。该方法CCβ为20ng/g。

Pinel等运用LC-MS/MS技术，将牛尿中硫脲嘧啶类药物3IBBr衍生物的检测限降低到ng/g级别。采用Nucleosil C18AB色谱柱(5um，2.5mm×50mm)分离，甲醇-0.5%乙酸为流动相梯度洗脱，流速0.3mL/min，ESI-电离源，毛细管电压3kV，锥孔电压40V，源温120℃，去溶剂温度300℃，氮气为雾化气和辅助气，流速分别为90L/h和600L/h，氩气为碰撞气，碰撞电压40eV，选择反应监测(SRM)模式检测。方法CCa在0.1～5.2μg/L之间，CCβ在2.6～23.2μg/L之间。邱元进等建立了牛奶中甲巯咪唑、硫脲嘧啶、甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和2-巯基苯并咪唑6种硫脲嘧啶类药物残留的LC-MS/MS分析方法。4-碘苄溴衍生物用Luna C18色谱柱分离，乙腈和5mmol/L乙酸铵溶液(含0.2%甲酸)进行梯度洗脱，ESI、多反应监测(MRM)模式检测，内标法定量。结果表明：牛奶中6种目标物在优化条件下分离良好，响应值高，峰形尖锐对称，在5～100μg/kg范围内呈良好的线性关系，相关系数厂均大于0.99；检出限为0.14～0.32μg/kg，定量限为0.48～1.1ug/kg；10ug/kg、20μg/kg和50μg/kg添加水平的平均回收率为82.8%～113.6%，RSD为2.4%～14.3%。

Lohmus等首先报道了采用UPLC-MS/MS测定尿液和甲状腺中甲巯咪唑、硫脲嘧啶、甲基硫氧嘧啶、丙基硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和2-巯基苯并咪唑的3IBBr衍生物的残留分析方法。衍生后的硫脲嘧啶类药物用Acquity UPLCTM BEHC18色谱柱(1.7μm，2.1mm×100mm)分离，水-乙腈-乙酸溶液(80+20+0.1，v/v)和水-乙腈-乙酸溶液(10+90+0.1，v/v)为流动相，梯度洗脱，流速0.5mL/min，ESI电离源，正负离子切换，SRM模式监测，内标法定量。方法CCa和CCβ均低于10μg/kg。VandenBussche等也采用UPLC-MS/MS测定尿液中的8种硫脲嘧啶类药物。净化后的该类药物不用衍生，直接UPLC-MS/MS测定。用Acquity UPLCHSST3柱(1.8μm，100mm×2.1mm)分离，0.1%甲酸和含0.1%甲酸的甲醇溶液为流动相梯度洗脱，流速0.3mL/min，三重四极杆质谱分析，ESI+电离源，喷雾电压3.5kV，雾化和毛细管温度分别为370℃和300℃，SRM模式监测。方法线性系数在0.982～0999之间；CCa在1.1～5.5μg/L之间，CCβ在1.7～7.5ug/L之间；RSD小于15.5%。

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