磺胺类药物残留分析技术（一）

时间：2023-03-25 07:33:32来源：food栏目：食品快速检测阅读：

磺胺类药物残留分析技术（一）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

2.1.4.1 前处理方法

(1)提取方法

SAs检测常用的样品提取方法有液液萃取法(LLE)、加压溶剂萃取法(PLE)、超临界流体萃取法(SFE)、基质固相分散技术(MSPD)等，并辅以超声辅助提取技术、微波提取技术。检测基质主要为动物可食组织、牛奶、鸡蛋、蜂蜜和水产品等。

1)液液萃取(liquid liquid extraction，LLE)

LLE是经典的样品处理方法。因为SAs不易溶于非极性有机溶剂，而易溶于极性有机溶剂，可以选用乙腈、氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯或者混合溶剂作为提取液。Cai等用乙腈提取，正己烷除脂，乙酸乙酯反提，超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)在15min内测定肉中的24种SAs。方法的回收率为67.8%～113.9%。Lopes等国采用低温快速液液萃取技术(LLE-FPVLT)，建立了一种新型的检测猪肝脏中15种SAs的多残留分析方法。在猪肝脏样品中加入乙，取上清液离心并用液氮浸没15秒，分离乙腈层，蒸干后中加入0.1%的甲酸溶液复溶，液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测。该方法线性度相关系数R2为0.97～0.99；检测限(CCa)为107.70～128.65ug/kg，检测能力(CCB)为115.40～157.29ug/kg，检出限(LOD)为5.58～16.75ug/kg，定量限(LOQ)为18.41～55.26ug/kg；在0.5、1.0、1.5倍MRL添加浓度，回收率均高于70%。Di Sabatino等用丙酮-氯仿(1+1，v/v)提取多种动物肌肉中的10种SAs，经阳离子交换柱净化后，C18色谱柱分离，高效液相色谱(HPLC)检测，方法回收率在66.3%～71.5%之间，LOQ为3～14ug/kg。Wu等建立了采用LC-MS/MS同时测定猪肉及猪肝中9种磺胺类药物残留的检测方法。样品经10%的Na2SO4溶液和乙腈-氯仿(10+1，v/v)提取，乙腈饱和正己烷去脂，使用乙二胺-.-丙基硅烷(PSA)和十八烷基键合相硅胶(ODSC18-N)两种基质分散净化剂净化，采用LC-MS/MS多反应监测(MRM)电喷雾(ESI)正离子模式测定，内标法定量。9种磺胺检出限为0.1～0.8ug/kg，在5 ug/kg、10 ug/kg、20ug/kg浓度添加水平，回收率为74.1%～115.8%，相对标准偏差(RSD)均小于6.2%。

虽然SAs属于酸碱两性物质，但主要呈弱酸性，等电点大都在3～5的范围内，具有较高的极性，在酸性条件下SAs更易溶解于有机相中。因此，可在酸性条件下用有机溶剂提取，常用磷酸或乙酸调节pH以提高提取效率。Zotou等采用HPLC检测禽肉和蛋中的12种SAs。0.6g样品加入5mL乙腈和40uL浓磷酸提取，提取液经正已烷液液分配净化提取，Nexus Abselut SPE柱净化，荧光衍生化后，用HPLC-荧光检测器(FLD)测定，该方法在3.0～300ug/L范围线性良好：肉的LOD为2～17μg/kg，平均回收率在96.9%～108.6%之间：蛋的LOD为2～15ug/kg，平均回收率在96.0%～108.4%之间。李锋格等建立了一种UPLC-MS/MS方法，测定鸡肝中12种SAs。样品用1%乙酸-乙腈溶液提取，NH2吸附剂净化，正己烷脱脂，UPLC-MS/MS检测，内标法定量。该方法在5-100ug/kg浓度范围内线性良好(r2>0.98)：在10～50ug/kg添加水平范围内，平均回收率为72%～121%，RSD为1.5%～23.4%；LOD为5ug/kg，LOQ为10ug/kg。刘芃岩等以建立了一种同时测定鸡肉中两类共10种兽药(包括3种磺胺)残留量的LC-MS/MS方法。样品经2%醋酸-乙脂提取，正已烷脱脂，过ENVI-18固相萃取柱净化，用LC-MS/MS进行定性和定量分析。10种药物在0.02～2.0mg/L范围内线性良好，相关系数均大于0.9988：LOD为1.10～6.85ug/kg，LOQ为3.68～22.85ug/kg：样品的平均加标回收率为68.9%～102.6%，RSD均小于8.6%。

也有采用水溶液提取动物组织中SAs的文献报道，主要是磷酸盐缓冲液。Pang等报道了采用LC-MS/MS测定蜂蜜中16种SAs的残留检测方法。样品用pH2的磷酸溶液溶解提取，阳离子交换柱和HLB柱净化，LC-MS/MS测定。该方法线性良好(r≥0.995)；在1.0～300ug/kg添加浓度的回收率为70.9%～102.5%，RSD为2.02%～11.52%；LOQ在1.0～12.0ug/kg之间。Li等到开发了同时检测鸡肉中4种SAs和7种氟喹诺酮药物的HPLC方法。样品用pH6.0磷酸盐缓冲液提取，固相萃取净化后，HPLC测定，方法平均回收率在78.0%～105.2%之间，RSD小于9.3%；SAs的LOQ为15.0ng/g。吴银良等明建立了同时测定牛奶中残留的9种SAs的固相萃取-HPLC分析方法。牛奶样品经磷酸盐缓冲液稀释后高速离心去除脂肪，过C18小柱和氨基固相萃取小柱净化后，用HPLC分析。9种SAs标准曲线的线性回归系数均在0.9999以上；LOD为1.7～2.8ug/L，LOQ为5.7～9.2ugL：在10ugL、20ug/L、40ug/L添加水平下，添加回收率为72.1%～88.3%，RSD为2.3%～5.0%。

同时，由于SAs可以与组织蛋白以糖苷键结合，常采用盐酸、三氯乙酸、高氯酸等释放组织中SAs并沉淀蛋白，Sheridan等开发了同时测定蜂蜜中14种SAs的残留检测方法。首先采用盐酸水解释放与糖结合的SAs，再经圆相萃取净化后，用LC-MS/MS测定。采用该方法对来自25个国家的116个样品进行分析，38%被发现至少有一种阳性。Mohamed等则用10%三氯乙酸溶解蜂蜜样品，将SAs从蜂蜜中释放出来，再用Na2HPO4溶液调节至pH6.5，乙腈-二氯甲烷(4+1，vv)提取，离心并过滤后，分取滤液旋蒸至干，复溶后LC-MS/MS检测。方法的LOD在0.4～4.5ugkg之间，LOQ在1.2～15pg/kg之间。Furusawall9建立了鸡蛋中SMM、SDM和SQ的HPLC检测方法。鸡蛋采用手持式超声被均质器用高氯酸溶液均质提取，提取液经离心、超滤后，进HPLC检测。该方法回收率在80.3%～88.4%之间，RSD在3.4%～5.8%之间：LOD小于0.05μg/g。

2)基质固相分散萃取(matrix solid-phase dispersion，MSPD)

MSPD快速样品处理技术是将样品与填料一起混合研磨，使样品均匀分散于固定相颗粒表面，制成半固态后装柱，然后根据“相似相溶”原理选择合适的洗脱剂洗脱。该技术浓缩了传统样品前处理中匀浆、组织细胞裂解、提取、净化等多个过程，避免了待测物在这些过程中的损失，提取净化效率高、耗时短、节省溶剂、样品用量少，但研磨的粒度大小和填装技术的差别会使淋洗曲线有所差异。不易标准化。SAs前处理中MSPD常用填料有C18和氧化铝等。

张素霞等以MSPD和HPLC为基础，建立了常用7种SAs的多残留快速分析方法。将猪肉组织与适量C18填料混合研磨，制成半固态装柱，SAs经二氯甲烷洗脱后直接用反相HPLC检测，可在1h内完成测定，LOD为0.01～0.1mgkg，在0.1～0.5mg/kg添加浓度范围内，7种SAs的平均回收率为70.6%±20.3%。Long等以开发了牛奶中8种SAs的残留检测方法。0.5mL牛奶加入2g C18含键合硅胶混匀，装柱，用8mL正已烷淋洗，8mL二氯甲烷洗脱，HPLC在270nm测定。该方法回收率在(73.1%±7.4%)～(93.7%±2.7%)之间，批内精密度为2.2%～6.7%。该作者用类似的MSPD技术，建立了猪肉和鱼肉中SAs的残留分析方法。Zou等以C18为吸附剂，基于MSPD技术，建立了蜂蜜中8种SAs的HPLC分析方法。在10～250ug/kg添加浓度范围，方法回收率大于70%，RSD小于16%，LOD为0.4μg/kg。

Kishida等2用中性氧化铝做MSPD的吸附剂，与鸡肉混合装柱，不用平衡和洗涤，直接70%乙醇洗脱，HPLC检测鸡肉中的6种SAs。该方法平均回收率为87.6%，RSD为0.5%～8.6%。该作者还采用该MSPD方法应用于牛奶、鸡肉、牛肉和猪肉中多种SAs残留的快速检测，方法回收率大于87.6%，LOD在6～40ug/kg之间。

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