磺胺类药物残留测定方法（一）

时间：2023-03-25 08:01:07来源：food栏目：食品快速检测阅读：

磺胺类药物残留测定方法（一）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

随着兽药残留分析技术的发展，仪器分析方法在残留检测领域的地位越来越受到重视，动物源基质中SAs残留分析常用仪器分析技术见表2-4。LC-MS/MS具有高效快速、灵敏高、重复性好及提供确证信息等优点，已经逐渐成为SAs残留分析中最常用的方法：而免疫分析技术也已成为SAs残留分析的研究热点，但如何提高免疫分析法的灵敏度，避免假阳性结果的出现，还有待进一步研究。

(1)高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)

HPLC是SAs残留分析的国际公认方法，但也有一定的局限性，主要表现在样品前处理步骤较多，分析时间长，不利于快速筛选，特别是在多残留分析时，很难实现色谱上的完全分离，而梯度洗脱的运用，可以一次分析更多的药物种类。随着超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography，UPLC)的发展，它同时实现了高分离度、高灵敏度和高分析速度，目前已经大量应用于SAs的残留分析。SAs是酸碱两性药物，其保留能力与流动相的pH、柱填料类型等有关。流动相一般为乙腈、甲醇、水，并常加入甲酸、乙酸、磷酸、磷酸盐缓冲液以及醋酸铵等，改善色谱分离，提高灵敏度。常用的色谱柱为Cig柱和苯基柱，通过紫外检测器(ultraviolet detector，UVD)、二极管阵列检测器(diode-array detector，DAD；photo-diode array detector，PDA)、荧光检测器(fluorescence detection，FLD)、质谱检测器(mass spectrometry detector，MSD)、电化学检测器(electrochemical detector，ECD)以及化学发光检测器(chemiluminescent detector，CLD)等进行检测。

1)紫外检测器(UVD)和二极管阵列检测器(DAD/PDA)

SAs结构中带有苯环，还具有较强的紫外吸收，紫外检测常用的波长范围为260-280nm。

万春花等建立了动物组织中的15种SAs的HPLC分析方法。样品用乙腈提取，经正己烷LLP净化和SPE净化后，进HPLC分析。采用C18色谱柱，柱温30℃，以乙腈-0.02%磷酸为流动相，流速1.0mL/min，梯度洗脱，在268nm下测定。方法加标回收率在80.3%～92.3%之间，灵敏度满足残留分析要求。Pecorelli等建立了同时测定动物肌肉中10种SAs的HPLC分析方法。匀浆后的样品用乙酸乙酯提取，阳离子交换SPE柱净化后，用HPLC-DAD在270nm检测。方法按照2002/657/EC对特异性、灵敏度、准确度等进行验证，性能指标满足SAs残留分析的要求。赵海香等以MSPD和HPLC技术为基础，采用低毒的乙酸乙酯为洗脱溶剂，建立了与环境友好的鱼肉组织中8种SAs的多残留快速分析法。采用C18柱分离，柱温30℃，50mmol/L NaH2PO4-乙腈(70+30，v/v)为流动相，流速0.7mL/min，270nm紫外检测。8种SAs被有效分离，在0.01～1.0ug/mL范围内线性相关系数在0.9999以上；添加回收率为76.0%～115.0%，RSD小于6.4%；仪器LOD均为0.01ug/mL，方法LOD为0.02ug/g。

Kishida等国建立了鸡血浆中SMM、SDM及其N-乙酰基代谢物的HPLC分析方法。样品用4mol/L硫酸铵溶液均质提取，离心后用HPLC检测。在聚乙二醇反相色谱柱上分离，0.001mol/L乙酸钠为流动相，PDA测定。在0.1ug/mL、0.5ug/mL、1.0ug/mL添加浓度，方法回收率大于78%，RSD小于4%；LOQ优于0.09ug/mL。Jen等建立了猪下水中SAs的残留分析方法。样品用乙酸乙酯提取，HPLV-UVD测定，ODS反相色谱柱分离。在0.05～10ug/mL范围，方法线性良好(r>0.9999)，适用于猪下水中SAs的测定。Kishida等采用HPLC-PDA还检测了鸡血浆、肌肉、肝脏和鸡蛋中的SMM、SDM及其NM-羟基乙酰化代谢产物。样品用乙醇在手持式超声波匀浆器中提取，以反相C4柱为分离色谱柱，乙醇-1%乙酸为流动相，梯度洗脱，PDA检测。方法回收率大于90%，RSD小于%，LOQ优于30ng/g。

Kishida等国还开发了原料乳中SMM、SDM及其N-乙酰基代谢物的HPLC分析方法。样品用乙醇-乙酸(97+3，v/v)提取，Hisep屏蔽疏水相(SHP)色谱柱分离，pH3.1 0.1%乙酸-乙醇(75+25，v/v)为流动相，PDA测定。在添加浓度25～500ng/mL的回收率均大于81%，RSD小于5%；LOQ优于25ng/mL。Tolika等开发了牛奶中SDZ、STZ、SMTH、SMZ、SMPZ、SMMX、SMXZ、SIX、SDMX、SQX等10种SAs的HPLC-PDA检测方法。用乙酸乙酯、正己烷、异丙醇混合提取，以0.1%甲酸-乙腈-甲醇为流动相，梯度洗脱，在265nm检测。3个添加水平下的回收率在93.9%～115.9%之间，RSD低于8.8%；CCa为101.61～106.84μg/kg，CCβ为105.64～119.01ug/kg。张丽媛等应用以离子液体为基础的均相液液微萃取技术，建立了酸奶样品中SD、SMI、SM2和SMZ的HPLC分析法。通过加盐和调节酸奶样品的pH，将酸奶样品中的蛋白质和脂类除去。用C18色谱柱分离，柱温35℃，流动相为0.1%甲酸乙腈溶液和pH3的0.1%甲酸，梯度洗脱，流速0.5mL/min，进样量20uL，检测波长265nm。SD、SMl、SM2和SMZ的LOD分别为8.17ug/L、7.43ug/L、6.71ug/L、7.51ug/L。应用该方法对4种酸奶样品进行分析，加标回收率在95.78%～104.38%之间，RSD低于5.23%。

表2-4动物源基质中常用的SAs残留分析技术

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